ขั้นตอนการทำสไลด์ถาวร
การเตรียมสไลด์โดยวิธีsquash technique
- เลือกดอกข้าวโพดที่มีขนาดแตกต่างกันประมาณ 4-6 ดอกย่อย นำมาวางเรียงบนสไลด์
- แกะอับเรณูออกจากดอกย่อยของข้าวโพดที่มีจำนวน 3 อัน/ดอกย่อย
- หยดสีย้อมโครโมโซมอะซีโต-ออร์ซีนบนอับเรณู ทิ้งไว้นาน 8 นาที ในระหว่างรอให้ใช้มีดตัด หรือหั่นอับเรณูให้เป็นชิ้นเล็กๆ เพื่อทำให้เซลล์ microsporocytes หลุดออกจากผนังของอับเรณูและให้สีย้อมเข้าไปในอับเรณูได้ดียิ่งขึ้น
- ใช้ปากคีบคีบผนังของอับเรณูและชิ้นส่วนอื่นๆ ที่มีขนาดใหญ่ทิ้งไป ปิดสไลด์ด้วยโคเวอร์กลาส ใช้กระดาษซับซับสีส่วนเกินออก
- กดสไลด์ด้วยวิธี squash technique ทำโดยนำกระดาษซับวางบนโต๊ะที่เรียบสม่ำเสมอ ไม่มีวัสดุอื่นๆ อยู่ใต้กระดาษซับ เพราะเมื่อกดสไลด์จะแตก วางสไลด์บนกระดาษซับ วางกระดาษซับปิดบนโคเวอร์กลาสบริเวณมุมด้านซ้าย ใช้นิ้วหัวแม่มือซ้ายกดที่กระดาษซับบริเวณที่อยู่บนโคเวอร์กลาสเพื่อไม่ให้โคเวอร์กลาสขยับ แล้วใช้กระดาษซับอีกแผ่นหนึ่งปิดทับโคเวอร์กลาสในส่วนที่เหลือจากนั้นจึงใช้นิ้วหัวแม่มือขวากดบนกระดาษซับตรงบริเวณที่มีเซลล์อยู่
การเตรียมสไลด์ถาวร
- อุ่นสไลด์ที่เตรียมโดย squash technique ที่อุณหภูมิ 45 องศาเซลเซียส นาน 5 นาที
- จุ่มสไลด์ในสารละลาย Acetic acid: Butanol (1:1) นาน 5 นาที
- จุ่มสไลด์ในสารละลาย Acetic acid: Butanol (1:3) นาน 5 นาที
- จุ่มสไลด์ในสารละลาย Butanol นาน 5 นาที
- แยกกระจกปิดสไลด์ออกจากสไลด์ วางบนกระดาษซับ ผึ่งให้แห้ง
- หยดน้ำยา permount บนสไลด์แผ่นใหม่ แล้วใช้กระจกปิดสไลด์จาก ข้อ 5 ที่ผึ่งแห้งแล้วปิดทับ กดกระจกปิดสไลด์ให้แนบกับสไลด์ ไม่ให้มีฟองอากา
- หยดน้ำยา permount บนสไลด์ที่ผึ่งให้แห้งจากข้อ 5 แล้วใช้กระจกปิดสไลด์แผ่นใหม่ปิดทับ กดกระจกปิดสไลด์ให้แนบกับสไลด์ ไม่ให้มีฟองอากาศ
- ทิ้งไว้ให้แห้ง ประมาณ 2 วัน แล้วจึงเก็บใส่กล่อง