ประสิทธิภาพของไคโตโอลิโกแซคคาไรด์ที่ผลิตจากกากเห็ดหลินจือโดยเอนไซม์ ไคโตซาเนสจากแบคทีเรียต่อการยับยั้งการเจริญของเซลล์มะเร็ง

ในการศึกษาการผลิตเอนไซม์ไคโตซาเนสเพื่อใช้ในการผลิตไคโตโอลิโกแซคคาไรด์ โดยทำการคัดแยก

แบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์ไคโตซาเนสจากถั่วเน่า พบว่ามีแบคทีเรียจำนวน 30 ไอโซเลท โดยมีแบคทีเรียไอโซเลท

TCM 1.2 และ TCR 1.3 ที่ให้กิจกรรมของเอนไซม์ไคโตซาเนสสูงเท่ากับ 0.265 U/ml และ 0.302 U/ml

ตามลำดับ เมื่อศึกษาสภาวะที่เหมาะสมต่อการผลิตเอนไซม์ไคโตซาเนส พบว่าทั้งไอโซเลท TCM 1.2 และ

TCR 1.3 ใช้ไคโตซานเป็นแหล่งคาร์บอนร้อยละ 1.5 w/v สารสกัดจากยีสต์เป็นแหล่งไนโตรเจนร้อยละ 1.0

w/v เลี้ยงในอาหารเหลวที่ความเป็นกรดเบสเท่ากับ 6.0 มีค่ากิจกรรมของเอนไซม์ซึ่งเท่ากับ 1.19 และ 1.27

U/ml ตามลำดับ ในวันที่ 5 ของการเลี้ยง สภาวะที่เหมาะสมต่อการทำงานของเอนไซม์ไคโตซาเนสที่ผลิตได้

จากทั้งสองไอโซเลทสามารถเกิดกิจกรรมได้ดีที่ค่าความเป็นกรดเบสในช่วง 5 - 6 และอุณหภูมิเท่ากับ 50 องศา

เซลเซียส ผลผลิตที่ได้จากการย่อยไคโตซานด้วยเอนไซม์ไคโตซาเนสที่ผลิตได้จากทั้งสองไอโซเลท ให้ผลผลิต

เป็นไคโตโอลิโกแซคคาไรด์หลายชนิด และเมื่อนำแบคทีเรียไอโซเลท TCM 1.2 และ TCR 1.3 มาจัดจำแนกชนิด

ของสายพันธุ์โดยการเปรียบเทียบลำดับเบสของยีน 16S rRNA โดยใช้ไพรเมอร์ 27F (5?-

AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3?) และ 1522R (5?-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3?) และทำการตั้งชื่อ

แบคทีเรียดังกล่าว คือ Bacillus subtilis TCM 1.2 และ Bacillus tropicus TCR 1.3 ตามลำดับ เอนไซม์

ไคโตซานเนสที่ผลิตได้จากแบคทีเรียทั้งสองไอโซเลทในงานวิจัยครั้งนี้ สามารถนำไปประยุกต์ในการผลิตไคโตโอ

ลิโกแซคคาไรด์จากแหล่งต่าง ๆ ได้

Chitosanase was applied to producing chitooligosaccharides. Chitosanase producing

bacteria were screened from fermented soybean (Tua Noa). Thirty isolates were found in this

study. High chitosanase activity was observed in the isolates TCM 1.2 and TCR 1.3 with 0.265

U/ml และ 0.302 U/ml, respectively. Optimization of enzyme production was investigated. The

use of 1.5% chitosan (w/v) as carbon source, 1.0 % yeast extract (w/v) as nitrogen source and

culturing for 5 days at pH 6.0 exhibited the highest activity 1.19 and 1.27 U/ml from isolates

TCM 1.2 and TCR 1.3, respectively. The crude enzymes were optimally active at pH 5.0 - 6.0

and 50?C. The products from chitosan hydrolysis with the crude enzymes were spitted to

chitooligosaccharides. Comparison of 16S rRNA sequences using two primers including 27F (5?-

AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3?) and 1522R (5?-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3?) of these 2

bacterial isolates, showed that they are genera of Bacillus subtilis TCM 1.2 and Bacillus

tropicus TCR 1.3, respectively. The chitosanase producing bacteria obtained from two bacteria

isolates in this study could be applied for chitooligosaccharide production from several

sources.